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    技術(shù)原理

       CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic圖片關(guān)鍵詞 Repeats)是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導(dǎo)Cas核酸酶對(duì)靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù)。在這一系統(tǒng)中,sgRNA引導(dǎo)序列靶定位點(diǎn)剪切雙鏈DNA達(dá)到對(duì)基因組DNA 進(jìn)行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈蠡蚪M特定基因位點(diǎn)進(jìn)行精確編輯,目前瑞思元已經(jīng)成功將此技術(shù)應(yīng)用于小鼠基因敲除/敲入模型制備,以及條件性敲除(Loxp系統(tǒng))模型制備。      

          目前瑞思元采取優(yōu)化過(guò)的野生型Cas9和雙切口Cas9n(Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn)。采用優(yōu)化過(guò)的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應(yīng)降到最低。


    H11位點(diǎn)定點(diǎn)過(guò)表達(dá)

           H11位點(diǎn)(也叫Hipp11)位于小鼠第11號(hào)染色體,是 Eif4enif1與Drg1 這兩個(gè)基因之間的一個(gè)位點(diǎn),由于H11位點(diǎn)位于兩個(gè)基因之間,外源基因插入后對(duì)內(nèi)源基因表達(dá)的影響很小,同時(shí)H11位點(diǎn)所在的Eif4enif1與Drg1這兩個(gè)基因的側(cè)翼序列區(qū)域具有廣泛的空間和時(shí)間EST表達(dá)模式,能夠使整合在此的外源基因受指定啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)而穩(wěn)定表達(dá)。該位點(diǎn)的純合敲入小鼠可正常發(fā)育和繁殖。

           利用CRISPR/cas9系統(tǒng)可以在H11位點(diǎn)構(gòu)建條件性基因過(guò)表達(dá)小鼠模型,即廣泛型強(qiáng)啟動(dòng)子pCAG與外源目的基因cDNA之間用loxP-stop-loxP結(jié)構(gòu)隔開(kāi),只有與組織特異性Cre工具鼠交配后,才會(huì)在特異細(xì)胞或組織中表達(dá)目的基因。

    圖片關(guān)鍵詞

    運(yùn)用

        用于人類(lèi)基因功能、蛋白功能的過(guò)表達(dá)研究

    技術(shù)優(yōu)勢(shì)

        研發(fā)周期:4-6個(gè)月;

    按設(shè)計(jì)精準(zhǔn)插入;

    基本保證過(guò)表達(dá);

    遺傳穩(wěn)定性高;

    無(wú)需篩選,直接用于分析

    制備流程圖片關(guān)鍵詞

    圖片關(guān)鍵詞


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