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技術原理

   CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術。在這一系統(tǒng)中，sgRNA引導序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA 進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈蠡蚪M特定基因位點進行精確編輯，目前瑞思元已經(jīng)成功將此技術應用于小鼠基因敲除/敲入模型制備，以及條件性敲除（Loxp系統(tǒng)）模型制備。      

      目前瑞思元采取優(yōu)化過的野生型Cas9和雙切口Cas9n（Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn）。采用優(yōu)化過的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應降到最低。

條件性基因敲除小鼠

      應用sgRNA-Cas9和donor的方法將loxP敲入到目的基因兩側(cè)，依賴于Cre酶進行條件敲除。

運用

    研究完全性敲除后致死性目的基因的生理或病理功能；

   研究目的基因在特定組織或細胞中的功能；

    研究目的基因在特定時期或特定階段發(fā)揮的作用；

技術優(yōu)勢

   研發(fā)周期短（4-6個月），同源重組效率高；

    打破對小鼠遺傳品系的限制，可以實現(xiàn)不同遺傳背景或在已有基因修飾小鼠模型基礎上進行基因編輯；

制備流程

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