技術原理
CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術。在這一系統(tǒng)中,sgRNA引導序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA 進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈蠡蚪M特定基因位點進行精確編輯,目前瑞思元已經(jīng)成功將此技術應用于小鼠基因敲除/敲入模型制備,以及條件性敲除(Loxp系統(tǒng))模型制備。
目前瑞思元采取優(yōu)化過的野生型Cas9和雙切口Cas9n(Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn)。采用優(yōu)化過的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應降到最低。
條件性基因敲除小鼠
應用sgRNA-Cas9和donor的方法將loxP敲入到目的基因兩側(cè),依賴于Cre酶進行條件敲除。
運用
研究完全性敲除后致死性目的基因的生理或病理功能;
研究目的基因在特定組織或細胞中的功能;
研究目的基因在特定時期或特定階段發(fā)揮的作用;
技術優(yōu)勢
研發(fā)周期短(4-6個月),同源重組效率高;
打破對小鼠遺傳品系的限制,可以實現(xiàn)不同遺傳背景或在已有基因修飾小鼠模型基礎上進行基因編輯;
制備流程
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