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技術(shù)原理

   CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導(dǎo)Cas核酸酶對(duì)靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù)。在這一系統(tǒng)中，sgRNA引導(dǎo)序列靶定位點(diǎn)剪切雙鏈DNA達(dá)到對(duì)基因組DNA 進(jìn)行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈?/span>基因組特定基因位點(diǎn)進(jìn)行精確編輯，目前瑞思元已經(jīng)成功將此技術(shù)應(yīng)用于小鼠基因敲除/敲入模型制備，以及條件性敲除（Loxp系統(tǒng)）模型制備。      

      目前瑞思元采取優(yōu)化過(guò)的野生型Cas9和雙切口Cas9n（Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn）。采用優(yōu)化過(guò)的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應(yīng)降到最低。

常規(guī)基因敲除小鼠

 應(yīng)用sgRNA-Cas9的方法對(duì)小鼠所有組織和細(xì)胞中的目的基因中全部外顯子或某些重要的外顯子或者結(jié)構(gòu)功能域進(jìn)行敲除，得到目的基因表達(dá)沉默的小鼠。

運(yùn)用

研究目的基因（完全性敲除后非致死性）對(duì)全身生理的功能，

可用于自發(fā)性大/小鼠疾病模型的建立，研究疾病致病機(jī)制和疾病治療的藥物研發(fā)；

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

      研發(fā)周期短（2-3個(gè)月），敲除效率高；

      可實(shí)現(xiàn)多基因同時(shí)敲除；

      打破對(duì)小鼠遺傳品系的限制，可以實(shí)現(xiàn)不同遺傳背景或在已有基因修飾小鼠模型基礎(chǔ)上進(jìn)行基因編輯；

制備流程

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